一种中华鲟VTG蛋白抗原及抗体及制备方法和应用,2019-长江水产研究所 长江水产研究所

一种中华鲟VTG蛋白抗原及抗体及制备方法和应用,2019

摘要:本发明公开了一种中华鲟蛋白抗原及抗体及制备方法和应用,步骤是:1. 重组中华鲟VTG蛋白抗原制备:1)设计上游引物,下游引物,扩增结构域截短序列;2)将pMD-18T-VTG质粒及Pet32a(+)空载体分别采用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ进行酶切后纯化目的片段,将二者连接为Pet32a(+)-VTG转化DH5a,涂于含有氨苄青霉素的LB培养基上培养;3)将Pet32a(+)-VTG质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,涂于含有氨苄青霉素的LB固体培养基上培养;4)将收集的菌体沉淀,用含8M尿素的蛋白缓冲液重悬沉淀,过滤收集上清得到重组蛋白。2. 重组中华鲟VTG蛋白抗原免疫日本大耳兔获得中华鲟VTG蛋白抗体。3. 中华鲟VYG蛋白抗原及抗体的用途。中华鲟VTG蛋白抗体与蛋白抗原免疫性好,效价能达到1:1000,检测结果阳性率高,具有良好的临床适用性。