在雄性动物中,精子的发生起源于精原干细胞。精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)存在于精巢或睾丸中,是一类既能自我复制又能分化为精子的干细胞。精原干细胞常常应用于生殖细胞移植、体外诱导精子发生以及细胞水平上对基因修饰生产转基因动物等方面。哺乳动物精原细胞体外分离、克隆及诱导等的研究取得了较大的进展,而鱼类精原细胞的研究仅限于斑马鱼、青鳉和罗非鱼、虹鳟等鱼类,鲟鱼精原细胞体外培养的相关研究尚未见报道。
达氏鲟(Acipenser dabryanus)是我国特有的一种淡水定居性鱼类,具有较高的经济价值和科研价值,被列为国家一级重点保护动物。自1990年初以来,未检测到达氏鲟自然繁殖活动,建立达氏鲟种质细胞库,实现达氏鲟生殖细胞移植,是人工保存达氏鲟物种重要的途径通过对达氏鲟精巢细胞消化分离和冷冻保存的研究,保护达氏鲟的遗传多样性,同时还为同种生殖细胞移植技术产生具有遗传多样性的可育后代,用于保种和人工增殖放流奠定基础;通过对达氏鲟精原细胞体外培养体系的建立和优化,实现精原细胞长期体外存活,为研究达氏鲟精巢微环境提供理论依据,同时也为其他鲟鱼的生殖细胞体外培养给予借鉴。
本研究以达氏鲟为研究对象,取精巢为试验材料做如下研究:对雄性达氏鲟性腺发育的连续检测,研究达氏鲟精巢的发育规律,揭示达氏鲟发育分期及发育速度与年龄增长的关系,确定精原细胞体外培养和冷冻保存的最适时期。第二,探讨两种酶消化分离达氏鲟精巢细胞的效果以及比较不同冻存方法对达氏鲟精巢细胞冻存效果的影响。第三,探究精原细胞体外培养的条件。
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