达氏鲟dmc1和ly75基因的cDNA克隆及在精子生成中的表达分析(向浩,2018)-长江水产研究所 长江水产研究所

达氏鲟dmc1和ly75基因的cDNA克隆及在精子生成中的表达分析(向浩,2018)

    达氏鲟(Acipenser dabryanus)是我国特有的一种淡水定居性珍稀鱼类。早期达氏鲟曾是长江上游重要的经济鱼类之一,20世纪后期由于过度捕捞、水利工程兴建、航道整治、挖沙活动等原因,达氏鲟生存环境遭到严重破坏,物种处于极度濒危状况,已于1988年被列为国家一级保护动物。因此,其物种保护、资源增殖的研究亟待加强,尤其在繁殖生物学方面的研究更是亟需关注。经过十多年的发展,鱼类生殖细胞移植技术已成功应用到多种鱼类,在种质资源保存、增殖放流和物种恢复方面具有重大的应用潜力。近年来有关达氏鲟精原细胞移植的研究已取得阶段性成果,但高效的移植依赖于精原干细胞的体外增殖培养。前期我们已开展了达氏鲟精原细胞培养方面的工作,但对培养的达氏鲟精原干细胞鉴定还有所欠缺。目前,已鉴定的达氏鲟生殖细胞标记基因有dndvasa,但是它们除了在精原细胞表达外,在精母细胞中也有表达,因此,有必要鉴定在特异类型生殖细胞表达的基因,进而为体外培养精原干细胞的鉴定奠定基础。
    本研究鉴定了两个生殖细胞特异表达的基因:dmc1ly75,通过RT-PCR 技术分别克隆得到达氏鲟dmc1ly75基因的编码区序列,运用生物信息学方法分析达氏鲟dmc1ly75基因编码的蛋白序列和系统进化关系,借助荧光定量PCR分析这两个基因在达氏鲟不同组织中的表达特征,结合组织学结果进一步分析了它们在不同发育时期精巢的表达特征,最后通过原位杂交定位技术对这两个基因在精巢组织细胞中的定位进行了研究。