选取淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主衣壳蛋白(MCP)基因保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物,通过优化反应条件,建立了SYBR GreenⅠ实时定量PCR的检测方法,并进行了敏感性、特异性分析。SYBR GreenⅠ实时定量PCR反应体系的最佳引物浓度为0.5μmol/L,方法的检测限为30个病毒拷贝,扩增产物的Tm值为74.5℃。该方法对淋巴囊肿病毒有特异性,不能扩增流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、虎纹蛙病毒(TFV)、蛙虹彩病毒(BIV)、新加坡石斑虹彩病毒(SGIV)、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及真鲷虹彩病毒(RSIV)。对12份发病牙鲆鱼样品进行检测,均感染淋巴囊肿病毒20份无临床症状的牙鲆经检测不含淋巴囊肿病毒。建立的LCDV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,具有成本低、特异、灵敏、快速等优点,可用于淋巴囊肿病毒的早期诊断。[中国海洋大学学报,2009,39(2):253-258]    作者:孙颖杰、周 优、岳志芹、陈 晓、梁成珠、应 骏、王 哲、汪东风。(吉林大学农学部畜牧兽医学院,辽宁出入境检验检疫局,山东出入境检验检疫局,中国海洋大学) |