选取淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus ,LCDV) 主衣壳蛋白(MCP) 基因保守序列,利用Primer Express2. 0软件设计引物,通过优化反应条件,建立了SYBR Green Ⅰ实时定量PCR 的检测方法,并进行了敏感性、特异性分析。SYBR Green Ⅰ实时定量PCR 反应体系的最佳引物浓度为0. 5μmol/ L ,方法的检测限为30 个病毒拷贝,扩增产物的Tm 值为74. 5 ℃。该方法对淋巴囊肿病毒有特异性,不能扩增流行性造血器官坏死病毒( EHNV) 、虎纹蛙病毒( TFV) 、蛙虹彩病毒(BIV) 、新加坡石斑虹彩病毒(SGIV) 、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒( ISKNV) 及真鲷虹彩病毒(RSIV) 。对12 份发病牙鲆鱼样品进行检测,均感染淋巴囊肿病毒20 份无临床症状的牙鲆经检测不含淋巴囊肿病毒。建立的LCDV 的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR 方法,具有成本低、特异、灵敏、快速等优点,可用于淋巴囊肿病毒的早期诊断。[中国海洋大学学报,2009年,第39卷,第2期,253-258]    作者:孙颖杰,周优,岳志芹等人。(吉林大学农学部畜牧兽医学院,辽宁出入境检验检疫局,山东出入境检验检疫局,中国海洋大学) |