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编码鳜传染性脾肾坏死病毒结构蛋白新基因ORF90.5L的鉴定分析

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鳜传染性脾肾坏死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV）全基因组序列于2001年完成测定，全基因组为111 362 bp，含有124个推测的开放阅读框（ORF）。2007年，Eaton等对12株已完成序列测定的虹彩病毒代表株进行分析比较，除了已经推测的ORF外，认为ISKNV基因组中还存在一个的核心基因（Core gene）ORF90.5L。本研究以ISKNV的cDNA为模板，根据Eaton等报道中推测的上下游位点设计引物扩增出一段963 bp的PCR产物。该序列编码一个320个氨基酸的蛋白质，推测分子量为35 kD，含有预测的跨膜区，与虹彩病毒属（Iridovirus）其他成员编码的肉豆蔻基膜蛋白有较高的同源性。将该片段克隆到原核表达载体pET32a（+）中，纯化表达的重组蛋白pET90.5L免疫昆明鼠获得高效价多克隆抗体。利用抗pET90.5L抗体与纯化病毒进行免疫印迹，结果表明，抗pET90.5L的多抗可以特异性识别病毒粒子中大小约为35 kD的蛋白条带，ORF90.5L 编码的蛋白应为病毒的结构蛋白。本研究旨在为ISKNV基因工程疫苗的研发和病源侵染机制研究提供基础参考。[中国水产科学，2010，17（4）：753-760] 作者：王庆，罗永文，刘春，曾伟伟，张超，石存斌，吴淑勤。（中国水产科学研究院珠江水产研究所，华南农业大学兽医学院）

日期：2011-04-18 阅读：次

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