从浙江宁波的发病鲈鱼(Lateolabrax japonicus)分离到1株致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)LY-1。从该菌的DNA样本中成功扩增出大小为873 bp的ToxR基因片段。DNA序列分析表明该序列与已登录哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ToxR基因同源性为96. 57%,与副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)、鳗弧菌(V.anguilarum)、创伤弧菌(V. vulnificus)、费氏弧菌(V. fisheri)、溶藻胶弧菌(V. alginolyticus)、霍利斯弧菌(V.hollisae)、拟态弧菌(V.mimicus)、河弧菌(V.fluvialis)的ToxR基因相似性为27. 62% ~72. 49%。选择哈维氏弧菌ToxR基因种内保守区段,设计1套环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术的特异引物,对扩增条件进行优化实验,在65℃孵育45 min的条件下即可完成哈维氏弧菌特异性扩增,成功建立了海水致病菌-哈维氏弧菌的LAMP快速检测方法。结果分析表明该方法对哈维氏弧菌DNA的最小检出量为1 fg,比PCR法灵敏度高3个数量级。利用LAMP方法快速检测哈维氏弧菌,目前在国内外还未见报道。[上海海洋大学学报,2010,19(5):601-607]    作者:张静,施慧,谢建军,许文军。(浙江海洋学院,浙江省海洋水产研究所) |