摘要：根据Gen Bank上登录的鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)ORF6基因序列(登录号:JQ815364.1)用Primer Express 3.0设计并合成ORF6基因特异性引物及Taq Man探针,建立了检测鲤疱疹病毒2型的微滴式数字PCR(dd PCR)方法。结果显示,dd PCR的检测灵敏度比q PCR高5倍。特异性和重复性检测结果表明,dd PCR和q PCR均具有良好的特异性和较高的重复性。q PCR和dd PCR标准曲线的r2值分别为0.999 2和0.997 5,表明dd PCR和q PCR均具有良好的线性关系。研究结果表明,该方法可以对Cy HV-2进行可靠的检测,可以满足Cy HV-2特性研究和感染诊断的需要。对60份临床样品的检测结果显示,在检出阳性的34份样品中,包含肾、脾、腮、肝、心和脑,表明该病毒在这些器官均有分布,其中肾的病毒含量相对最高,脑的病毒含量相对最低。总之,本研究建立的dd PCR方法灵敏度高、特异性强、能快速检测到极低含量的病毒,适用于Cy HV-2的快速检测和病原流行病学调查。

 

[1]张瑞雪, 周井祥, 王好,等. 鲤疱疹病毒3型研究进展[J]. 科学养鱼, 2016(6):54-56.