研究采用草鱼H1 基因启动子, 以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)外衣壳蛋白VP7 基因为靶基因, 以增强型绿色荧光蛋白(eGFP) 为报告基因, 构建了3 个小发卡RNA (shRNA) 表达载体pH1siGCRV(x)-CMVeGFP。CIK 细胞感染实验表明,pH1siGCRV2-CMVeGFP 具有较高的病毒抑制作用。通过显微注射将pH1siGCRV2-CMVeGFP 导入稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)受精卵,获得转基因稀有鮈鲫P0 代群体。转基因稀有鮈鲫攻毒实验显示, 转基因稀有鮈鲫死亡率为30%, 抗草鱼出血病能力显着提高。进一步的实时荧光定量PCR 检测证实, 转基因稀有鮈鲫脾脏、后肠和肝脏中GCRV 的含量显着低于对照鱼, 并随着时间的延续逐渐减少, 转基因稀有鮈鲫体内GCRV 的复制受到有效抑制。研究为抗草鱼出血病转基因鱼育种奠定重要基础。[水生生物学报,2010,34(4):837-842]    作者:廖莎,陈芸,杜富宽,汪亚平,廖兰杰, 朱作言。(中国科学院水生生物研究所,中国科学院研究生院) |