日本沼虾VASA蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定-长江水产研究所 长江水产研究所
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日本沼虾VASA蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定

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      Vasa 基因具有在性腺中特异表达的特点, 在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框, 连接到pET-32a载体, 构建重组表达质粒pET32a-vasa, 转化大肠杆菌BL21, 经IPTG诱导融合表达, 表达产物经SDS-PAGE分析表明, 融合蛋白主要以包涵体形式存在, 分子量约85ku, 表达量约占包涵体总蛋白的48.7%, W estern-blotting检测表明, 融合蛋白可特异地被anti-H IS标签抗体识别。用Ni2+ -NTA纯化后的融合蛋白免疫家兔, 制备获得多克隆抗体, ELISA 显示该抗体效价达1:160000, Western 免疫鉴定显示该抗体不仅能识别融合蛋白, 而且也能识别日本沼虾性腺粗提液中的内源性VASA 蛋白,免疫组化进一步显示, VASA 蛋白主要分布在卵母细胞核周围和精原细胞质中, 成熟精子中无信号, 暗示VASA 在日本沼虾生殖细胞发育分化过程中扮演重要角色。[水产学报,2010,34(10):1495—1501]    作者:崔峥,朱小玲,邱高峰。(上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室,上海市高校水产养殖学E-研究院,上海海洋大学水产与生命学院)
日期:2011-03-21 阅读:次
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