应用同源克隆和RACE 技术克隆了军曹鱼(Rachycentron canadium Linnaeus)Ig κ轻链的cDNA全序列, 并分析其在组织中的表达。军曹鱼Ig κ的cDNA 全长969 bp, 3′端的非编码区域(UTR)为188 bp, 5′UTR 为52bp, 开放阅读框为729bp, 编码242个氨基酸, 分子量约为26.255kD, 理论等电点7.52。推测的军曹鱼Ig κ恒定区氨基酸序列同(Seriola quinqueradiata)、大西洋鲑(Salmo salar)的Ig轻链同源性最高, 达77%以上, 可变区氨基酸序列与的相应序列同源性最高, 达87%。通过构建系统进化树可以看出, 军曹鱼Ig κ恒定区氨基酸序列同、大西洋鲑的L3、斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的G等鱼的轻链均为κ型的聚为一支, 同大西洋鲑的L2、斑马鱼(Danio rerios)的L2、鲤(Cyprinus carpio)的L2 等均为λ型的明显不同, 由此可推断此序列属于Ig κ型。利用半定量PCR 技术, 发现在健康鱼体中κ链基因在肝脏和鳃中的表达量较高, 在肠和脑组织中几乎没有表达。经鲨鱼弧菌(Vibrio carchariae)JT2 刺激192 h 后, κ链基因在采样的各个组织中均有表达, 尤其在头肾、肠、鳃和脾中的表达量较正常水平明显升高, 而肝的表达量有所下降, 脑组织有κ链基因的少量表达。说明经刺激后头肾、脾脏、肠、鳃是免疫球蛋白的主要表达场所, 在抵御病原感染过程中发挥着重要作用。[中国水产科学, 2011, 18(1): 48]    作者:侯月娥,冯娟,宁章勇,茅莉娜,郭志勋,许海东,孔小明。(中国水产科学研究院南海水产研究所,华南农业大学) |