从虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)肌肉中提取总RNA, RT-PCR克隆虾夷扇贝中变应原原肌球蛋白的全长基因, 根据序列设计带有酶切位点的特异性引物, 扩增扇贝tropomyosin 的完整开放阅读框, 与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia. coli BL21(DE3), 诱导表达后, Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western-blot 检测其免疫学活性。经序列测定, 该基因含有长度为855bp的开放阅读框, 编码284个氨基酸,其在GenBank数据库中的登录号为EU839640。SDS-PAGE检测该重组变应原在大肠杆菌中高效表达36 kD的目的蛋白, 且重组变应原具有良好的IgE 结合活性。研究获得了具有变应原活性的重组虾夷扇贝tropomyosin, 为扇贝过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。[水生生物学报,2010,34(5):979-983]    作者:刘志刚,邬玉兰,吴淑勤,石存斌,夏皓玉,陈丽斐。(深圳大学过敏反应和免疫学研究所,中国水产科学研究院珠江水产研究所) |