应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质。转染细胞中的转录产物经RT-PCR扩增后,凝胶电泳鉴定出与GFP基因片段分子量大小一致的条带,经测序证明其为GFP基因序列。结果表明,GFP基因可以在草鱼 CIK细胞内高效率成功表达,为构建以GFP为报告基因的真核重组质粒及研究草鱼出血病 DNA疫苗奠定了重要的基础。[生物学杂志,2013,30(5):23-26]  作者:郝贵杰,潘晓艺,袁雪梅,姚嘉赟,徐 洋,蔺凌云,尹文林,沈锦玉(浙江省淡水水产研究所) |