采用RT-PCR 技术从哲罗鱼主要免疫器官——脾脏总RNA 中获得免疫球蛋白( imm unog lobulin, Ig)轻链可变区cDNA 克隆,随机挑取51个阳性克隆菌落进行测序,得到46条完整的不重复序列,用以确定哲罗鱼IgL 的家族种类,为哲罗鱼病毒性疾病的疫苗研制提供理论依据。经过BLUST网络对比,结果显示:其与GenB ank报导的虹鳟(序列号为X68517. 1和X68519. 1)序列的相似性均达90%以上, 46条序列的核苷酸相同率分别为最低86. 1% ( P4与P43)至最高的99. 8% ( P21与P38)之间不等 经DNA s tar 5.0 软件包MegA ling中JotunHein方法对所得序列进行氨基酸同源性比较,得到两个不同的家族 通过可变性参数计算方法可知哲罗鱼IgL 的可变性主要集中在CDRs区,可变性最高的区域为CDR3区 对可变区中CDR3序列进行分析后,得出哲罗鱼Ig轻链可变区的重排方式是Jκ 基因片段位于Vκ 基因片段的3′端的结论,这种重排方式增加了核苷酸不同的连接方式, 使哲罗鱼抗体具有更多的可变性空间对照其亲水性分布图可知:可变区的亲水性氨基酸主要分布于LP前端, FR1末端,完整的FR2, FR3两端,以及CDR1, CDR2和CDR3前端。[水产学报,2009年,第33卷,第6期,996-1002]    作者:魏巍、刘红柏、王获等人。(黑龙江水产研究所,东北农业大学动物科技学院) |