采用化学合成法分别合成靶向草鱼呼肠孤病毒( GCRV) RNA 基因组节段L2 片段上的RNA 聚合酶基因(RdRp) 和S4 片段上的外衣壳蛋白基因(OCP) 的小干扰RNA 分子siRNA-RdRp1 286 、siRNA-RdRp1 441 和siRNA-OCP117 , 脂质体转染法转染草鱼肾脏组织细胞系CIK。转染6h 后用草鱼呼肠孤病毒感染细胞, 48h 后收集感染细胞的培养液, 微量培养法测定病毒1gTCID50 / 0.1mL 值。以细胞管家基因β-actin mRNA 水平为参照,RT-PCR 法检测呼肠孤病毒siRNAs 靶基因的mRNA 水平。病毒滴度测定结果表明: 转染siRNA2RdRp1 286 、siRNA-RdRp1 441 和siRNA-OCP117 三种siRNAs 的病毒滴度1gTCID50 / 0.1mL 分别为4.41 ±0.16 、3.83 ±0.44和1.94 ±0.42 , 极显着低于阳性感染对照组的病毒滴度(7.92 ±0.52 , P < 0.01) , 转染siRNA 阴性对照组的病毒滴度无明显变化(7.50 ±0.17 , P > 0.05) 。RT-PCR 检测结果显示: 与阳性感染对照组比较, 转染siRNA-RdRp1 286 、siRNA-RdRp1 441 和siRNA-OCP117 后的CIK细胞中GCRV mRNA 水平显着下降, 抑制率分别为82.08 ±2.15 %、89.19 ±1.14 %和92.62 ±0.17 % , 而转染阴性对照组对GCRV mRNA 水平没有显着的影响( P >0.05) 。 [病毒学报,2009,25(5):392-398]    作者:李兵,范玉顶,李艳秋,徐进,周勇,曾令兵。(华中农业大学,中国水产科学研究院长江水产研究所) |