白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立-长江水产研究所 长江水产研究所
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白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立

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    白斑综合征病毒(white spot syndrom virus, WSSV) 是甲壳类动物的重要病原, 作者采用提纯的WSSV免疫BALB / c小鼠, 取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合, 用间接ELISA法筛选阳性孔, 经有限稀释法克隆, 共得到3株能特异分泌抗WSSV的单克隆抗体(Mab) 的杂交瘤细胞(1E9、1E10、4F5) 。将3株杂交瘤细胞注射小鼠, 制备腹水单克隆抗体, EL ISA效价为1∶104 ~105。1E9、4F5的抗体亚型均为IgG1, 1E10的抗体亚型为IgG2b。特异性实验表明: 3株单抗与虾类病原桃拉综合征病毒(TSV) 、罗氏沼虾诺达病毒(MrNV) 、哈维氏弧菌(V.harveyi) 均无交叉反应。Western bolt分析表明: 单抗1E9与病毒28kD外膜蛋白特异性结合。采用生物素标记纯化后的单抗1E9, 并建立了生物素- 亲和素酶联免疫吸附法(Biotin - Adivin ELISA, BA - ELISA) 用于WSSV的检测, 该方法对提纯病毒的检测灵敏度约为4ng, 对病虾血淋巴的检测灵敏度达1∶25000。[大连水产学院学报,2009,24(增刊)]    作者:刘问,钱冬,严小军。(宁波大学,淡水水产研究所鱼病研究室)
日期:2010-03-03 阅读:次
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