大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的重组分泌表达-长江水产研究所 长江水产研究所
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大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的重组分泌表达

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    依据大菱鲆红体病虹彩病毒( Turbot viral reddish body iridovirus , TRBIV) 主要衣壳蛋白(Major cap sid protein ,MCP) 基因序列,设计了一对特异性引物,并在正反向引物中分别引入EcoR I 和Not I 酶切位点,从而将PCR 扩增得到的TRBIV MCP 基因双酶切后定向克隆到真核表达载体p GAPZαA 的GAP 启动子的下游位点,并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内。经抗生素Zeocin 筛选、PCR、EcoR I 和Not I 双酶切以及测序分析,构建了含有α-factor 信号肽的真核重组表达载体p GAPZαA MCP。重组表达质粒p GAPZαA MCP 经Av r Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33 中,挑选阳性克隆,提取表达上清经SDS-PA GE 和Western-blot 免疫印迹分析。结果显示, TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达。阳性重组酵母菌经过72 h 诱导培养后,重组TRBIV MCP 的表达量高达60.2μg/ ml 左右。[渔业科学进展,2009,30(3):55-61]    作者:吴成龙,史成银,黄倢,孔晓瑜。(中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国海洋大学水产学院)
日期:2010-03-03 阅读:次
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