依据大菱鲆红体病虹彩病毒( Turbot viral reddish body iridovirus , TRBIV) 主要衣壳蛋白(Major cap sid protein ,MCP) 基因序列,设计了一对特异性引物,并在正反向引物中分别引入EcoR I 和Not I 酶切位点,从而将PCR 扩增得到的TRBIV MCP 基因双酶切后定向克隆到真核表达载体p GAPZαA 的GAP 启动子的下游位点,并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内。经抗生素Zeocin 筛选、PCR、EcoR I 和Not I 双酶切以及测序分析,构建了含有α-factor 信号肽的真核重组表达载体p GAPZαA MCP。重组表达质粒p GAPZαA MCP 经Av r Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33 中,挑选阳性克隆,提取表达上清经SDS-PA GE 和Western-blot 免疫印迹分析。结果显示, TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达。阳性重组酵母菌经过72 h 诱导培养后,重组TRBIV MCP 的表达量高达60.2μg/ ml 左右。[渔业科学进展,2009,30(3):55-61]    作者:吴成龙,史成银,黄倢,孔晓瑜。(中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国海洋大学水产学院) |