利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Ⅱβ(GtH Ⅱβ)亚基基因5 ′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtH Ⅱβ亚基基因5 ′端侧翼序列长度为1 354 bp,其中包括TATA盒、ERE、ARE、PRE、GRE、LHX3、SF-1、Sp1、Pit-1、NF-Y 和AP1等可能对GtH Ⅱβ 亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点;转录起始位点位于- 40 ~ 10 bp。进一步利用PCR方法扩增得到了811 bp( - 771 ~ +40 bp)、601 bp( - 561 ~ +40 bp)、386 bp( - 346 ~ +40 bp)、239 bp( - 199 ~+40 bp) 和98 bp( - 58 ~ +40 bp) 的5个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtH Ⅱβ 亚基基因5 ′ 端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础依据。[中国水产科学,2010,17(4):649-658]    作者:曲宪成,崔严慧,周正峰,曲学伟,金一春,胡萍华,尚晓莉,程翠,张开岳,张勇,蒋骄云。(上海海洋大学水产与生命学院,烟台市牟平区渔业技术服务中心) |