促甲状腺激素(Thyroid-stimulating hormone, TSH)具有调节生长, 发育, 代谢和生殖的功能, 但是在低等脊椎动物中的功能研究较少。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)促甲状腺激素TSHβ除在垂体中表达外还在性腺中表达, 进一步发现TSHβ也在赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)性腺中表达。且在人工诱导的赤点石斑鱼中, 随着雄性化的转变, TSHβ 转录水平升高。为研究石斑鱼TSHβ特殊表达方式的调控机制, 采用基因组步移技术扩增获得赤点石斑鱼TSHβ 5′端序列共5112bp。将1864bp核心片段顺向克隆到pBK-TOL2载体中, pTSHβ-TOL2重组质粒与转座酶mRNA共注射斑马鱼一细胞期受精卵。Western blot结果显示, 在受精后10h的尾芽胚中可检测到GFP的表达, 胚体晚期GFP表达量最高。荧光显微镜追踪观察发现, 受精后12—30hpf(Hours post fertilization)观察到GFP在原始生殖细胞(PGC)区域表达 36hpf—7dpf观察到GFP除在PGC区域表达外还在垂体中表达。由此可见, 赤点石斑鱼TSHβ5′端1864bp的序列具有特异定位的启动子活性。[水生生物学报,2010,34(4):822-827]    作者:李辰昱,汪洋,周莉,桂建芳。(中国科学院水生生物研究所) |