根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N 端氨基酸测序结果设计简并引物, 采用RACE 方法, 首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH, GenBank 登录号: DQ341280), 该基因全长为1457 bp, 开放阅读框为330 bp, 编码110 个氨基酸(含有35 个氨基酸的信号肽) 其成熟肽包含C7-C44、C24-C40 和C27-C53 三个二硫键, 有典型的CHH 家族结构域。该cDNA 编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH 同源性最高, 达到了85%。Northern 杂交和半定量RT-PCR 显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH 基因表达, 提示该基因的表达具有一定组织特异性。利用pCR®T7/NT TOPO®TA 系统重组表达MIH 成熟肽, 纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L, 纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH。研究解决了CHH 家族神经肽在机体中的表达量少, 直接纯化较难的问题, 为深入研究MIH 的作用机制和在生产上控制中华绒螯蟹蜕皮和生长奠定了基础。[水生生物学报,2011,35(2):210-217]    作者:孙妍,张亦陈,刘逸尘,王雪惠,王宇凡,耿绪云,孙金生,杨卫军。(天津师范大学生命科学学院,天津市水产养殖病害防治中心,浙江大学生命科学学院) |