采用基因克隆技术获取草鱼(Ctenopharyngodon idellus) 细胞色素 P450 3A(CYP3A)cDNA 序列长1 849bp,包含完整开放阅读框(open reading frame,ORF)1 542bp,1个终止密码和含 polyA 信号 3′UTR;ORF 编码514个氨基酸,含信号肽(29aa),2个跨膜螺旋区(23aa,23 aa), 血红素结合域(21aa)和6 个底物识别位点(SRS1-6);与其他脊椎动物CYP3A氨基酸序列相似度达60%~92%。用实时定量PCR 和分光光度计法分别研究了草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idellus kidney cell line CIK)中利福平(rifampicin,RIF)诱导CYP3A基因表达和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性,采用红霉素脱甲基酶活性法测定CYP3A的活性。结果显示,诱导组CIK细胞中CYP3A mRNA表达量在8 h最高,而CYP3A酶活在10 h最高;CYP3A mRNA和酶活性与对照组均具显着差异性(P<0.05)。CYP3A转录水平先于相应酶活变化表达,且转录水平表达显着高于酶活性,这很可能反映了RIF 对 CYP3A 的诱导主要作用于转录水平而不直接作用于酶活,本研究旨为药物对CYP3A转录调控和活性调节提供科学依据,并为渔药代谢酶的研究提供理论依据。[中国水产科学,2011,18(4):720-727]    作者:符贵红,杨先乐,喻文娟等。(上海海洋大学水产与生命学院,中国水产科学研究院东海水产研究所) |