摘要：卵黄蛋白原(Vitellogenin，Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物， 通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法， 进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列， 氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 kD。构建Vtg功能区段融合原核表达载体pET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白， 并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清，Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以纯化的中华鲟重组Vtg蛋白为抗原，中华鲟Vtg多克隆抗血清为抗体，建立了中华鲟血浆Vtg的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA)，标准曲线线性回归方程为y=–0.2916x+0.6794， 相关系数R2为0.9976。该方法检测的灵敏度为4.12 μg/mL，最低检测限为0.3 μg/mL， 批内和批间变异系数分别为2.52%和3.42%。通过对不同发育时期雌性中华鲟血样检测， 表明此ELISA方法可初步用于雌性中华鲟性腺发育时期监测。

冷小茜, 叶欢, 杜浩, 李创举, 危起伟. 中华鲟Vtg间接竞争ELISA检测方法的建立和应用. 水生生物学报, 2018, 42 (4): 779-785.